怎麼分辨抗體是否可以用來做免疫共沉澱《十萬個為什麼》

《知識問答,以下為網友的回答》

  • 回答1
    作者:

    通常情況下來,為了最大限源度的保證免疫共沉澱的特異性,最好是用純化的抗體,血清裡面雜質

    太多了,非常容易引起非特異吸附。

    當然,如果做的是過表達的重組蛋白的互做,並且隻是做驗證工作,也可以用血清試一下。不過可能還是會出現背景高的問題。

    其實決定免疫沉澱成敗最關鍵的點就是抗體的質量,包括純度和特異性。

  • 回答2
    作者:神級人氏

    不需要。或者說需要分開一個個證明。用一個抗體去做IP,然後分別用3個抗體做IB,看你抓下的蛋白是否是3個蛋白複合物。

    抗體(antibody)指機體的免疫系統在抗原刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分佈在血清中,也分佈於組織液及外分泌液中。 抗體通常由一些基礎單元組成,每一個抗體包括:

    兩個長(大)的重鏈,以及兩個短(小)的輕鏈。而輕鏈和重鏈之間以雙硫鍵連接。輕鏈和重鏈又分為可變區和恆定區,而不同類型的重鏈恆定區,將會導致抗體種型的不同。

  • 回答3
    作者:

    簡單地說ELISA是檢測是否存在某物質(如某種蛋白),而免疫共沉澱是為了檢測目標蛋白與其他蛋白是否相互作用。ELISA一般方法是將目的物質的抗體加入,再加入能夠結合該抗體的另一種被修飾的抗體,後者修飾部分是具有一種酶活性可將某種物質催化形成有色物質,因此顯色陽性反應說明存在目標物質。而免疫共沉澱是將蛋白X抗體結合在固定相上,將細胞非變性裂解後浸泡固定相,吸取沒有結合的雜質後檢測被結合組分,這樣所有在細胞中能結合X的蛋白質就一起被分離出來,因此可確定體內條件下蛋白X是否和其他蛋白相互作用。

  • 回答4
    作者:南京金益柏生物科技有限公司

    我覺得你是想用熒光標記的抗NGF/COX-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法,這樣的話熒光抗體隻anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti NGF或COX-2的,這樣就不能用於流式了。

    如果一個抗體可以用來“做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,ELISA”,我估計著是HRP或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒光標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

    我隻用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

  • 回答5
    作者:

    不需要。或者說需要分開一個個證明。用一個抗體去做

    IP,然後分別用3個抗體做IB,看你抓下的蛋白是否是3個蛋白複合物。

    抗體(antibody)指機體的免疫系統在抗原刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分佈在血清中,也分佈於組織液及外分泌液中。 抗體通常由一些基礎單元組成,每一個抗體包括:

    兩個長(大)的重鏈,以及兩個短(小)的輕鏈。而輕鏈和重鏈之間以雙硫鍵連接。輕鏈和重鏈又分為可變區和恆定區,而不同類型的重鏈恆定區,將會導致抗體種型的不同。

  • 回答6
    作者:小豪

    可以用兔抗人的其他抗體做對照,已知不與你的目的蛋白有結合的

    希望能解決您的問題。

  • 回答7
    作者:南京金益柏生物科技有限公司

    免疫熒光是直接染色還是間接法?我覺得你是想用熒光標記的抗NGF/COX-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法,這樣的話熒光抗體隻anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti NGF或COX-2的,這樣就不能用於流式了。

    如果一個抗體可以用來“做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,ELISA”,我估計著是HRP或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒光標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

    我隻用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

    樓上兩位還是要仔細看下產品說明書

  • 回答8
    作者:匿名用戶

    如果說區別的話,免疫沉澱是單一的特異性抗

    體結合其對應抗原,使之聚集沉澱。免疫共沉澱是a抗體結合A抗原,b抗體結合B抗原,如果A抗原能與B抗原相互作用而結合的話,最終aAbB都連在一起沉澱,檢測方法可以使用ab在一起激發熒光,分開無熒光,所以當檢測到熒光則說明AB有相互作用,無則沒相互作用,也可使a固定在固相載體,檢測b,若檢測到b則AB有相互作用,若沒檢測到則無相互作用。基本來說免疫沉澱是看有沒有抗原抗體結合,免疫共沉澱則是看兩個抗原有無相互作用

  • 回答9
    作者:匿名用戶

    通常情況下,為了最大限度的保證免疫共沉澱的特異性,最好是用純化的抗體,血清裡面雜質太多了,非常容易引起非特異吸附。

    當然,如果做的是過表達的重組蛋白的互做,並且隻是做驗證工作,也可以用血清試一下。不過可能還是會出現背景高的問題。

    其實決定免疫沉澱成敗最關鍵的點就是抗體的質量,包括純度和特異性。